人羧基酯酶2A（hCES2A）是一种重要的内质网（ER）驻留酶，负责多种含酯药物和环境毒素的水解代谢或活化。之前报道的hCES2A荧光底物存在发射波长有限、特异性低和定位精度差等问题，从而极大地限制了hCES2A的原位功能成像和药物发现。鉴于此，上海中医药大学葛广波、Ping Wang等采用合理的配体设计策略，构建了一种高特异性的hCES2A近红外（NIR）底物。经过支架筛选和识别基团优化，HTCF被确定为一种理想的近红外荧光基团，具有优异的光物理特性和高ER积累能力，同时几种HTCF酯类极有可能成为良好的hCES2A底物。
本文要点：
（1）TP-HTCF（HTCF的叔戊酯）是一种理想的底物，具有超高的灵敏度、出色的特异性和可观的信噪比。加入hCES2A后，TP-HTCF可迅速水解，释放出HTCF，这是一种化学性质稳定的产物，在670纳米波长处发出明亮的荧光信号。
（2）建立了一种基于TP-HTCF的生化检测方法，用于从内部化合物库中高通量筛选强效且具有细胞活性的hCES2A抑制剂。此外，TP-HTCF在活细胞、小鼠肝脏切片和肿瘤异种移植小鼠中对hCES2A的成像具有很高的成像分辨率。总之，这项研究展示了一种合理的策略，可用于开发ER驻留靶酶的高特异性荧光底物，而TP-HTCF则可作为一种实用工具，用于在活体系统中感知hCES2A。
Rationally Engineered hCES2A Near-Infrared Fluorogenic Substrate for Functional Imaging and High-Throughput Inhibitor Screening
Yufan Fan, Tiantian Zhang, Yunqing Song, Zhipei Sang, Hairong Zeng, Peiqi Liu, Ping Wang, and Guangbo Ge
Analytical Chemistry Article ASAP
DOI: 10.1021/acs.analchem.3c02873
https://doi.org/10.1021/acs.analchem.3c02873
