作为一种小型RNA引导的核酸内切酶,IscB与Cas9具有相似的功能。IscB的尺寸比Cas9的一半还小,因此更适合体内递送。然而,IscB在真核细胞中较差的编辑效率限制了其在体内的应用。在这里,辉大(上海)生物科技有限公司Zhou Yingsi、中国科学院Yang Hui利用工程化的IscB内切酶实现微型碱基编辑。
本文要点:
1) 作者报道了OgeuIscB及其相应的ωRNA工程,以开发一种在哺乳动物系统中高效的IscB系统,并命名为enIscB。通过将enIscB与T5外切酶(T5E)融合,作者发现enIscB-T5E具有出与SpG-Cas9相当的靶向效率,同时在人类细胞中具有减少的染色体易位效应。
2) 此外,通过将胞嘧啶或腺苷脱氨酶与enIscB尼克酶融合,作者实现了小型IscB衍生的碱基编辑(miBEs),并且具有强大的编辑效率(高达92%)来诱导DNA碱基转化。总的来说,该工作将enIscB-T5E和miBE确立为基因组编辑的通用工具。
Dingyi Han et.al Development of miniature base editors using engineered IscB nickase Nature Method 2023
DOI: 10.1038/s41592-023-01898-9
https://doi.org/10.1038/s41592-023-01898-9